外泌體等細胞外囊泡（EV: Extracellular Vesicle）不僅參與排放生物體內(nèi)的廢棄物，同時也是細胞間的通信媒介。根據(jù)分泌的細胞不同，EV的特性及其內(nèi)含物（核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等）也有所差異，目前正在嘗試將參與疾病的細胞來源EV及其內(nèi)含物作為生物標記應(yīng)用于“液體活檢"，即通過體液樣品診斷疾病。

為實現(xiàn)液體活檢的開發(fā)和應(yīng)用，需要從大量的樣品中高效地分離和純化EV。但超速離心法等傳統(tǒng)方法單次可處理的樣品數(shù)有限，從多個樣品中分離和純化EV需要花費龐大的人力和物力。

因此，F(xiàn)UJIFILM Wako開發(fā)了EV分離純化用試劑盒MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS，適用于提取核酸和蛋白質(zhì)的自動提取設(shè)備（如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等）。本試劑盒采用與金澤大學的華山教授共同開發(fā)的EV分離純化技術(shù)“PS親和法"^1），配合自動提取設(shè)備，可同時分離和純化高純度且低損傷EV的樣品上限為96份。

◆產(chǎn)品概要

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS是使用PS親和法分離和純化細胞外囊泡（EV）的試劑盒，適用于自動提取設(shè)備（如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等）。由于可從多達96份樣品中分離和純化EV，因此也適用于利用EV進行生物標記的探索和高通量篩選 (High-throughput screening，HTS) 。

適用自動提取設(shè)備（分離成果經(jīng)FUJIFILM Wako驗證的設(shè)備）

● KingFisher™ Flex（Thermo Fisher Scientific等）

與手動款試劑盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）的區(qū)別

比較本試劑盒與手動分離純化試劑盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2, 產(chǎn)品編號：290-84103），兩者的區(qū)別如下表所示。另，EV的回收效率基本持平。（參考“性能數(shù)據(jù)"）

◆原理

PS親和法是FUJIFILM Wako研發(fā)的EV分離方法，使用了與存在于EV表面的磷脂酰si氨酸（PS）特異性結(jié)合的Tim4。

通過PS-Tim4結(jié)合的高特異性和螯合劑，可在完整狀態(tài)下溫和地洗脫高純度EV。

◆實驗方案

使用KingFisher™ Flex分離純化EV（進行從親和反應(yīng)到洗脫一系列過程時）

※將親和反應(yīng)和洗脫步驟作為單獨的程序分別進行，并使用新的tip comb進行洗脫，可能可以減少樣品中的雜質(zhì)。更多信息請參閱使用說明書。

實驗方案的詳細內(nèi)容和設(shè)置示例請查閱使用說明書。

◆數(shù)據(jù)

與手動試劑盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）比較的性能數(shù)據(jù)

通過NTA，比較分離的粒子數(shù)

使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (Auto，自動提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (Manual，手動提取)，從血清、肝素血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清（COLO201）中分離和純化EV。通過Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)確認EV的粒子數(shù)

【結(jié)果】

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手動試劑盒獲得了相同程度的粒子數(shù)。

通過ELISA，比較分離的粒子數(shù)

使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自動提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手動提取)，從血清、肝素血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清（COLO201）中分離和純化EV。然后使用PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) （產(chǎn)品編號：298-80601）確認EV的回收率。

【結(jié)果】

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手動試劑盒獲得了相同程度的回收率。

通過蛋白質(zhì)組學分析，比較分離的蛋白質(zhì)種類、蛋白量

使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自動提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手動提取)方法對200 μL人血清分離和純化EV。蛋白質(zhì)組學分析回收的EV溶液。

（1）鑒定的蛋白質(zhì)種類

【結(jié)果】

在4次實驗中，MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS與手動試劑盒相比，鑒定的蛋白質(zhì)數(shù)量始終更多、再現(xiàn)性更高。

（2）EV標記蛋白質(zhì)的量

【結(jié)果】

分別使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手動試劑盒進行分離的EV中所含的EV標記蛋白質(zhì)之間并無顯著差異，自動化對EV的回收率沒有影響。

（3）非EV標記的量（以白蛋白為例）

【結(jié)果】

與手動試劑盒相比，使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS純化分離的非EV標記物白蛋白量更少，表明可回收雜質(zhì)更少的EV。

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