蛋白質(zhì)組學(xué)用蛋白質(zhì)增溶劑

LysoPure™ Protein Extraction-PTS Solution

◆蛋白質(zhì)組學(xué)中的蛋白提取挑戰(zhàn)

蛋白質(zhì)組學(xué)（Proteomics）是一種全面分析樣品中蛋白質(zhì)的方法。它的過(guò)程包括從樣品中提取蛋白質(zhì)、使用消化酶切割蛋白質(zhì)，再通過(guò)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）分析肽段的結(jié)構(gòu)信息。近數(shù)十年，大量的改進(jìn)方法應(yīng)用于LC-MS/MS，例如色譜柱和色譜填料的改進(jìn)，以及質(zhì)譜的靈敏度和掃描速度的提升，使得同時(shí)對(duì)多個(gè)樣本進(jìn)行分析得以實(shí)現(xiàn)，與此同時(shí)，對(duì)于低豐度蛋白的定性以及定量評(píng)價(jià)也得以實(shí)現(xiàn)。

LC-MS/MS的前處理步驟——蛋白質(zhì)提取和酶切對(duì)蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果起到至關(guān)重要的作用。其中最大的挑戰(zhàn)是提高蛋白質(zhì)的回收率同時(shí)還需要在低漏切的情況下保證酶解效率。尤其是膜蛋白這類(lèi)疏水性高難以提取的一類(lèi)蛋白質(zhì)。在蛋白質(zhì)組學(xué)中膜蛋白的提取常需要使用強(qiáng)力的增溶劑。然而，強(qiáng)力的增溶劑會(huì)抑制后續(xù)步驟使用的消化酶的活性，影響肽段分離和LC-MS/MS中的離子的檢測(cè)。

因此，F(xiàn)UFJIFILM Wako開(kāi)發(fā)了以脫氧膽酸鈉為主要成分的相轉(zhuǎn)移溶劑（Phase Transfer Surfactant），這是一款可溶解難溶蛋白，不抑制消化酶的活性且容易去除的理想增溶劑^1）。使用了它的前處理法命名為PTS法，該方法已被廣泛報(bào)道為一種用于蛋白組學(xué)分析制備疏水蛋白（包括膜蛋白）的有效方法。

圖1. 使用PTS法提取蛋白

基于文獻(xiàn)1）制備

◆LysoPure™ Protein Extraction-PTS Solution

LysoPure™ Protein Extraction-PTS Solution是在蛋白質(zhì)組學(xué)前處理步驟的蛋白提取中使用的增溶劑。該產(chǎn)品基于PTS方法開(kāi)發(fā)，可有效溶解難溶性蛋白，同時(shí)不抑制消化酶的活性，并可通過(guò)液-液分配方式輕松去除試劑。本產(chǎn)品是根據(jù)之前的報(bào)道PTS溶液^1-2）改良的，相比以前的PTS溶液，它的蛋白增溶性和蛋白消化酶活性更高，而且因消化酶導(dǎo)致的漏切也更低。也可用于外泌體等細(xì)胞外囊泡的蛋白質(zhì)組學(xué)。

◆特點(diǎn)

● 可提取疏水性高的蛋白質(zhì)，包括膜蛋白

● 不抑制消化酶活性

● 通過(guò)液液分配方式可輕易去除

◆Protocol

從細(xì)胞中提取蛋白

從細(xì)胞外囊泡（EV）中提取蛋白（使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）

詳細(xì)的Protocol請(qǐng)參考產(chǎn)品的使用說(shuō)明書(shū)。

◆數(shù)據(jù)

蛋白的可溶性

蛋白消化酶的活性和漏切的發(fā)生率

蛋白消化酶的活性

漏切的發(fā)生數(shù)

CDC：e去氧膽酸；SC：膽酸鈉；SDC：脫氧膽酸鈉；SLS：月桂酰肌氨酸鈉；UDC：xiong去氧膽酸

【結(jié)果】

盡管SDS+SLS的yi蛋白酶活性最高，但漏切的數(shù)量最多。相比之下，盡管本產(chǎn)品在yi蛋白酶中的酶活性低于SDC+SLS，但賴胺酰內(nèi)肽酶的裂解活性最高，漏切數(shù)較低。因此，本產(chǎn)品是一款酶活性高，漏切數(shù)少，性能平均的PTS溶液。

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