Phos-tag™是一種可特異性捕獲磷酸化Ser、Thr、Tyr等物質(zhì)的功能分子，由日本廣島大學(xué)大學(xué)院醫(yī)齒藥學(xué)綜合研究科醫(yī)學(xué)品分子機(jī)能科學(xué)研究室開發(fā)。以Phos-tag™ 丙烯酰胺（Phos-tag™ Acrylamide）為首開發(fā)的多種Phos-tag™ 產(chǎn)品被應(yīng)用于世界范圍內(nèi)的基礎(chǔ)研究，并且在GPCR通路及Wnt通路的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分析方面也取得了優(yōu)秀成果。

◆分離磷酸化蛋白！

在制備SDS-PAGE預(yù)制膠過程中加入Phos-tag™ Acrylamide，即可根據(jù)磷酸化水平和磷酸化位點(diǎn)分離磷酸化蛋白與非磷酸化蛋白。

原理

1. 電泳中的磷酸化蛋白捕獲2個(gè)二價(jià)金屬離子。

2. 磷酸化水平越高電泳速度越慢。

3. 根據(jù)磷酸化水平進(jìn)行分離。（即使磷酸化位點(diǎn)的數(shù)目相同，但只要位置不同就能分離）

特點(diǎn)

●　可檢測市售抗磷酸化抗體無法檢測的磷酸化蛋白。

●　可檢測磷酸化水平及磷酸化位點(diǎn)。

●　可同時(shí)檢測磷酸化與非磷酸化

Phos-tag™實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)手冊，點(diǎn)擊此處查看

從制作Phos-tag™ SDS-PAGE預(yù)制膠開始，Phos-tag™ 相關(guān)信息一覽

◆實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

① α-casein去磷酸化反應(yīng)隨時(shí)間的變化

使用堿性磷酸酶隨時(shí)間（孵育時(shí)間：0-120 min）處理α-casein（產(chǎn)品編號：038-23221），并使用Phos-tag™ SDS-PAGE和常規(guī)SDS-PAGE分離去磷酸化處理的樣品。

② 野生型/突變型Noxa表達(dá)的MCL-1磷酸化水平變化

使野生型（wt）及突變型（3E，KR，5A）的Noxa在肺小細(xì)胞癌細(xì)胞株H209細(xì)胞中表達(dá)，并進(jìn)行細(xì)胞溶質(zhì)（Cytosol）組分和HM（Heavy Membrane，含線粒體較多）組分分離。通過Phos-tag™ SDS-PAGE分離出樣品中的MCL-1（40 kDa），使用抗MCL-1抗體進(jìn)行Western blotting檢測。

【數(shù)據(jù)提供】

日本醫(yī)科大學(xué) 先進(jìn)醫(yī)學(xué)研究所 基因控制部門 中嶋亙

③ 二維電泳中的應(yīng)用： hnRNP K異構(gòu)體的磷酸化分析

通過免疫沉淀法，從經(jīng)LPS刺激后的小鼠巨噬細(xì)胞J774.1的細(xì)胞核提取液中，分離得到hnRNP K。在二維電泳中，一維使用IPG膠（pH 4.7-5.9），二維使用Phos-tag™ SDS-PAGE，分離hnRNP K的異構(gòu)體（66 kDa，64 kDa）。使用質(zhì)譜儀可以確認(rèn)不同的點(diǎn)代表不同的異構(gòu)體或修飾位點(diǎn)。

【數(shù)據(jù)提供】

橫濱市立大學(xué) 生命納米系統(tǒng)科學(xué)研究科 生物體超分子系統(tǒng)科學(xué)專業(yè)，木村彌生（Dr. Y. Kimura）、平野久（Dr. H. Hirano）理化學(xué)研究所RCAI 小原收

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◆檢測磷酸化蛋白！

▌Phos-tag™ Biotin

Phos-tag™ Biotin是Phos-tag™ 分子與生物su結(jié)合的產(chǎn)品，無需使用抗磷酸化抗體即可檢測與PVDF膜上的磷酸化蛋白。

本產(chǎn)品進(jìn)需配合“HRP 結(jié)合親和素"進(jìn)行使用。

特點(diǎn)

●　結(jié)合與磷酸化種類無關(guān)

●　推薦用于檢測無合適的抗磷酸化抗體的蛋白

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▌Phos-tag™ 凝膠熒光染料

Phos-tag™ 凝膠熒光染料，是一種可在生理 pH 范圍內(nèi)，對凝膠中的磷酸化蛋白進(jìn)行染色的熒光染料。進(jìn)行SDS-PAGE后，用本產(chǎn)品處理聚丙烯酰胺凝膠，可以對磷酸化蛋白進(jìn)行特異性染色。本系列有波長不同的Yellow（黃）、Magenta（品紅）、Cyan（藍(lán)綠）、Aqua（淺綠）四種顏色。每管規(guī)格為0.2 mg，可對約20個(gè)迷你凝膠進(jìn)行染色。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

使用Phos-tag™ 熒光凝膠染色，篩選組an酸激酶抑制劑。結(jié)果表明，激酶抑制劑對磷酸化存在濃度依賴性抑制。

【數(shù)據(jù)提供】

廣島大學(xué)大學(xué)院 醫(yī)學(xué)科學(xué)研究科 醫(yī)藥分子機(jī)能科學(xué)研究室 木下惠美子，木下英司，小池透

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◆純化磷酸化蛋白！

產(chǎn)品列表

*此產(chǎn)品由Manac Inc.生產(chǎn)并銷售。

◆質(zhì)譜分析磷酸化蛋白

Phos-tag™ 質(zhì)譜分析用試劑盒（產(chǎn)品編號：305-93551）通過與MALDI-TOF/MS的樣品進(jìn)行混合，即用于磷酸化蛋白的質(zhì)譜分析。本產(chǎn)品包含三種不同的分子量的Phos-tag™ 分子。

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